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 產(chǎn)品類別：外周血單個核細胞的分離
 
產(chǎn)品編號：LDS10750125
 
產(chǎn)品名稱：人全血單個核細胞分離液 醫(yī)用級（細胞培養(yǎng)處理試劑盒 試劑1）
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/瓶
 
產(chǎn)品價格：￥3600.00元
 
 
用于分離人全血單個核細胞分離液  醫(yī)用級

樣本密度分離液（人全血單個核細胞分離液）說明書
 
【包裝規(guī)格】
 
200ml/瓶
 
【實驗前準(zhǔn)備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
首先根據(jù)樣本量大小，分以下幾種情況：
 
一、 使用 15ml 離心管時：
 
情況 A：血液樣本量小于 3ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 15ml 離心管，加入 3ml 分離液。

 

• 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-650g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。

 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。

 
情況 B：血液樣本量為 3-6ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 15ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

 

• 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，400-650g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果，但最大離心力最好不超過 1000g）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個

 
核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。

 
二、 使用 50ml 離心管時：
 
情況 A：血液樣本量為 6-10ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 50ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

 

• 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，500-950g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果，但最大離心力最好不超過 1200g）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。

 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。

 
情況 B：血液樣本量為 10-20ml 時，實驗方法如下：
 

• 取一支 50ml 離心管，先加入與血液樣本等量的分離液。

 

• 用吸管小心吸取血液樣本加于分離液之液面上，650-110g，離心 20-30min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果，但最大離心力最好不超過 1200g）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個

 
核細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。
 

• 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個核細胞層到另一 15ml 離心管中，向所得離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118），混勻細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸細胞。

 
分離圖例
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取血 2h 內(nèi)進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 吸取過多的單個核細胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加。

 

• 吸取過多的單個核細胞層上層溶液會導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。

• 如所實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。

 

• 當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時，最優(yōu)稀釋方法：將血液與樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119）1:1 稀釋混勻備用。注：不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图毎寐始盎钚?。如血液?/li>

 
本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時間。
 
【儲存條件及有效期】
 
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗淋巴細胞提取率及純度均大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進行參考。
 

	紅細胞		白細胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
	（4.0-5.5）×1012				（1.0-3.0）×1011
含量（個/L）		中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】

 

• 所獲得淋巴細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

 

• 所獲得淋巴細胞的核酸提取技術(shù)。

 

• 所獲得淋巴細胞的鑒定方法A.流式細胞技術(shù)B.免疫組化技術(shù)C.原位雜交技術(shù)

 
D.PCR 技術(shù)
 
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1.  由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
 

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

 
離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速